蛋白的案例
CADD蛋白結構分析、虛擬篩選、分子對接（蛋白-蛋白、蛋白-多肽）
時間
名稱
內容
第一天上午
生物分子互作基礎
1.生物分子相互作用研究方法
1.1蛋白-小分子、蛋白-蛋白相互作用原理
1.2 分子對接研究生物分子相互作用1.3 蛋白蛋白對接研究分子相互作用
蛋白數據庫
1. PDB 數據庫介紹
1.1 PDB蛋白數據庫功能
1.2 PDB蛋白數據可獲取資源
1.3 PDB蛋白數據庫對藥物研發的重要性
2.PDB 數據庫的使用
2.1 靶點蛋白結構類型、數據解讀及下載
2.2 靶點蛋白結構序列下載
2.3 靶點蛋白背景分析
2.4 相關數據資源獲取途徑
2.4 批量下載蛋白晶體結構
第一天下午
蛋白結構分析
1. Pymol 軟件介紹
1.1 軟件安裝及初始設置
1.2 基本知識介紹（如氫鍵等）2.Pymol 軟件使用
2.1蛋白小分子相互作用圖解
2.2 蛋白蛋白相互作用圖解
2.3 蛋白及小分子表面圖、靜電勢表示
2.4蛋白及小分子結構疊加及比對
2.5繪相互作用力
2.6 Pymol動畫制作實例講解與練習：
（1）尼洛替尼與靶點的相互作用，列出相互作用的氨基酸，并導出結合模式圖
（2）制作結合口袋表面圖
（3）Bcr/Abl靶點的PDB結構疊合（4）制作蛋白相互作用動畫
（5）針對ACE2和新冠病毒Spike的蛋白晶體復合物，制作蛋白-蛋白相互作用
第二天上午
同源建模
1. 同源建模原理介紹
1.1 同源建模的功能及使用場景
1.2 同源建模的方法
2.
展開 發現G蛋白偶聯受體蛋白新的別構位點
G蛋白偶聯受體蛋白（GPCRs）又稱七次跨膜螺旋膜蛋白。GPCRs參與著人體的各種生理功能，包括神經信號傳遞，細胞分化，視覺，嗅覺等1-3。人類的重大疾病如老年癡呆癥，癌癥，艾滋病也與GPCRs密切相關。GPCRs是最為熱門的藥物設計和篩選靶標蛋白，目前40%左右的上市藥物都是基于GPCRs而設計4,5。因此研究和理解GPCRs的結構與功能，對當今藥物設計至關重要。
一個蛋白質的特有生理功能與活性，是由它特定的三維結構決定的。因此從蛋白三維結構來理解GPCRs的功能是當今藥物設計中必不可少的一個環節。隨著結構生物學技術突飛猛進的發展，截止到2018年7月，已經了50多個不同種類的GPCRs結構被解析出來。這其中涵蓋了GPCRs 的A,B,C和F亞家族。在這些解析的結構當中，人們發現藥物小分子可以結合在GPCRs的不同部位，這其中包括傳統的正構位點(orthosteric site)和多個別構位點(allosteric site)，諸如：膜外ECL2 loop區域，第一、二跨膜螺旋區域，第二、三跨膜螺旋區域，第三、四跨膜螺旋區域，第四、五跨膜螺旋區域、膜內G蛋白結合區域。不同的小分子結合位點所處的化學環境有所不同，這樣則給當代藥物發現與設計提供了新的機遇。
盡管傳統結構生物學對人們理解蛋白的生理功能提供了不可或缺的方法和信息，但它也有自己的缺陷。比如傳統結構生物學不能告訴人們為什么GPCRs結合激動劑(agonist)之后可以被激活，而結合拮抗劑(antagonist)的時候為什么信號通路會被阻斷。此外，單個GPCRs晶體結構也不能告訴人們GPCRs具體的激活動態過程是怎樣的。與之相比，計算結構生物學則很好的彌補了傳統結構生物學的不足6,7。比如：通過在計算機上構建磷脂雙層和溶劑模型，可以模擬GPCRs在細胞生理環境下的動態過程（圖一）。
展開 四川大學高會樂教授課題組Biomaterials：蛋白冠對轉鐵蛋白修飾納米粒跨血腦屏障轉運以及腦腫瘤靶向性的影響
轉鐵蛋白受體（TfR）在血腦屏障（BBB）及腦腫瘤細胞上均高表達，且與轉鐵蛋白（Tf）具有較高的親和力，因而Tf常被用作靶向分子修飾納米載體以提高其腦腫瘤靶向性。然而，納米粒進入血液循環后，會迅速自發地吸附血漿蛋白，進而在其表面形成蛋白冠。蛋白冠對靶向分子的屏蔽作用極大地阻礙著靶向分子與其受體的特異性結合。受體介導的BBB跨膜轉運通常分為三部分：納米粒表面的靶向分子被細胞膜蛋白識別而介導內吞、納米粒的細胞內轉運以及納米粒的外排。然而，至今為止，多數研究均集中在蛋白冠對靶向分子與其受體的識別的影響方面，而對整個BBB轉運過程的影響知之甚少。此外，跨過BBB后的納米粒進一步靶向腦腫瘤細胞的能力也是未知。基于此，四川大學高會樂教授等人在Biomaterials上發表相關研究，探究了蛋白冠對Tf修飾納米粒跨BBB轉運及隨后的腦腫瘤靶向性的影響。
該研究從入胞、胞內轉運和出胞三方面系統性探究了體內外蛋白冠對Tf介導的腦腫瘤靶向納米粒BBB跨膜轉運效率的影響，強調了體內外蛋白冠對該轉運過程的不同影響。體外蛋白冠的形成使Tf介導的受體特異性識別能力、溶酶體逃逸能力以及跨膜轉運能力喪失；而體內蛋白冠的形成雖然保留了受體識別能力和溶酶體逃離能力，但效率有所削弱。此外，該研究還發現跨過BBB后的納米粒可進一步靶向腦腫瘤細胞。BBB跨膜轉運前后的蛋白組學分析表明，Apo A-I蛋白的存在可能有利于納米粒的BBB跨膜轉運。該研究為有效解決腦腫瘤靶向納米遞藥系統BBB跨膜轉運效率低的問題提供了參考依據，為新型腦靶向策略的提出提供了方向。
展開 基于Gromacs的蛋白分子識別研究
氫鍵作用是可以增強VAMP2與APOE蛋白之間的親和力，為了進一步評價蛋白之間親和力的大小差異，圖5b給出了APOE2，APOE3和APOE4蛋白與VAMP2在模擬過程中的結合自由能隨模擬時間的變化。從圖中可以看出，APOE蛋白與VAMP2的結合能在60 ns之后基本穩定，APOE2，APOE3和APOE4與VAMP2的結合能平均值分別為-548.851±116.578 kJ/mol，481.21±110.52 kJ/mol和-568.57±140.47 kJ/mol。
通過分析APOE蛋白與VAMP2之間的氫鍵作用和結合能，可以發現VAMP2與APOE4之間的氫鍵作用更強，進而使得二者的親和力也更強。
圖5 APOE蛋白與VAMP2之間氫鍵數量（a）和結合能（b）隨MD模擬時間的變化
APOE3和APOE4與VAMP2結合的差異
為了進一步研究VAMP2與APOE蛋白結合的差異，圖6給出了VAMP2蛋白在APOE表面的結合模式。從圖中可以看出，VAMP2蛋白主要依靠結構中間的α螺旋與APOE蛋白進行結合，主要結合在APOE蛋白的親水性凹槽中，因此可以推測親水作用是二者的分子識別過程中的關鍵作用力之一。另外VAMP2蛋白與APOE蛋白結合表面附近也存在一些疏水區域，疏水作用也可以進一步增強蛋白的結合。圖6中還給出了VAMP2結構中可以與Snap25、Syntaxin蛋白形成SNARE復合物的區域（31-91），從圖中可以看出，SNARE區域可以與APOE蛋白完全結合，進而影響VAMP2與其他蛋白質的作用。
展開 
用于蛋白純化設備中測量液體壓力的光纖傳感器
蛋白純化要利用不同蛋白間內在的相似性與差異，利用各種蛋白間的相似性來除去非蛋白物質的污染，而利用各蛋白質的差異將目的蛋白從其他蛋白中純化出來。每種蛋白間的大小、形狀、電荷、疏水性、溶解度和生物學活性都會有差異，利用這些差異可將蛋白從混合物如大腸桿菌裂解物中提取出來得到重組蛋白。蛋白純化設備廣泛應用于生物化學研究應用領域，是重要的操作技術。蛋白純化設備利用顆粒不同程度的顆粒吸附力來使分離的目的達到蛋白質的選擇吸附分離。蛋白純化設備采用低溫有機溶劑沉淀法，使用如甲醇，乙醇等與水可混溶的有機溶劑，降低多數蛋白質的溶解度并且將其析出，和鹽析相比較，這種方法的分辨率更加的高，然而蛋白質比較容易變形，需要在低溫下進行。
而在做蛋白純化實驗時，對于大多數不具備購買高昂的蛋白自動純化儀的實驗室，往往會選擇使用自裝的鎳柱或肝素樹脂柱等對細菌所表達的蛋白進行純化，在這個過程中需要有人一直的在旁邊盯著蛋白純化裝置，時常調節恒流泵的流速，否則流速過快則會使含目的蛋白的液體溢出裝置外，浪費蛋白且增加實驗時間，流速慢時則會使自裝柱中的樹脂接觸空氣，這種情況下則更為嚴重，不僅樹脂會被氧化失去吸附蛋白的能力需要丟棄而且接觸空氣的蛋白也會被氧化對后續實驗造成影響，最終會使純化蛋白實驗失敗。
在許多基于光纖的生物傳感器中，能夠最大化折射率靈敏度并因此提高檢測極限的設備的工程設計通常是在損害信號穩定性、可重復性和信噪比的情況下實現的。作為驗證其性能的示例性分析物，注意力集中在C-反應蛋白(CRP)上，該C-反應蛋白是涉及多種病理的相關生物標志物，已被廣泛研究。
工采網提供的加拿大FISO 光纖壓力傳感器 - FOP-M是一種光纖壓力傳感器，主要用在可能出現高溫的場合，如航空和國防。除此之外，此款傳感器也是惡劣和危險環境下一般工業應用的有用工具。
展開 ：環糊精調制的I型膠原蛋白自組裝來制備仿生角膜植
圖3 膠原蛋白與環糊精間的分子相互作用及其對原纖維形成的影響
(a) 圓二色光譜用來證明可溶性膠原蛋白和β環糊精相互作用后熱穩定性的變化；
(b) 有無環糊精條件下膠原蛋白三螺旋結構的圓二色光譜；
(c) 將β環糊精和β環糊-琥珀酰加入可溶性膠原蛋白后，紫外-可見光譜吸收峰值的偏移；
(d) 通過QCM分析得到的膠原蛋白涂覆基底上β環糊精和β環糊-琥珀酰沉積和結合引起的頻率變化；
(e) 通過ITC測量的β環糊精與膠原蛋白之間的結合親和力；
(f) β環糊精化學結構以及β環糊精疏水內核與膠原蛋白疏水基團之間的相互作用的示意圖；
(g) β環糊-琥珀酰化學結構以及將β環糊-琥珀酰引入到膠原蛋白后高度親水琥珀酰側鏈帶來額外相互作用的示意圖。
展開 基于Gromacs進行膜蛋白體系的分子動力學模擬
今天以KALP15蛋白為例，主要介紹基于Gromacs進行膜蛋白體系的構建和模擬。
1. 蛋白結構預處理。首先通過可視化軟件（VMD、pymol等）檢查結構文件中的分子成分，去除不需要的組分。然后通過pdb2gmx命令講原始結構文件進行轉換并選擇相應力場。
2. 選擇合適的膜組分。根據自身需要選擇合適的磷脂成分（https://people.ucalgary.ca/~tieleman/download.html 可下載相關結構和力場）。并且在該步驟利用蛋白和磷脂力場構建需要的topol文件。
3. 選擇合適的蛋白和磷脂取向。由于膜蛋白的取向和在膜上的高度是固定的，因此要根據文獻報道確定合適的取向和位置。該步驟可使用trjconv和editconf等命令可以進行構象的調整。如圖所示
4. 磷脂對蛋白質的包裹。由于上個步驟中構建的體系僅僅是調整了取向，磷脂還是非常松散，因此需要將磷脂進行收縮堆積。這里參考使用了InflateGRO方法。通過genrestr命令對蛋白質進行位置限制，保證蛋白質位置不變，僅僅改變磷脂位置，讓其自身進行縮放，可縮放多次，直至達到結構的設定數值。
5. 模型構建完成之后，需要使用genion和solvate命令添加離子和水。但是此時需要注意，該步驟填充的水和離子會出現雙層膜之間，這種結構是不合理的，需要手動去除雙層膜熟睡核心的水分子。完成后結果如圖所示：
6. 隨后就可以通過grompp命令產生tpr文件并使用mdrun命令進行計算。
7. 結果分析：對于蛋白可以采用二級結構、RMSD等參數刻畫蛋白質特征，對于膜或者磷脂來說則可以通過序參數表征膜的有序程度例如有序相和無序相等。如圖所示：
也可以通過density命令分子膜的密度等特征。如圖所示：
在膜蛋白體系的模擬中，有許多其他的小問題需要注意。
展開 北鯤云超算平臺賦能蛋白設計助推生物制藥行業發展
北鯤云超算平臺賦能蛋白設計助推生物制藥行業發展
隨著科技進步，生物制藥正在被視為改寫人類命運的關鍵。北鯤云超算平臺蛋白設計助推生物制藥行業發展，提供蛋白質結構設計時所需的龐大的計算和資源儲存資源，幫助生命科學與生物制藥的發展，讓蛋白設計為生物制藥發展加足馬力。
作為云計算平臺領域中的代表，北鯤云SaaS平臺在高性能計算領域中具備了強大的優勢。在蛋白設計中，從高效進行基于測序和藥物篩選，到對大量的蛋白質分子結構與基因序列數據進行匹配，北鯤云豐富的應用場景和高效的運行速度，為生物制藥的數據化與可視化提供最基礎算力。
同時北鯤云還針對當前生物制藥企業落后的計算機系統和計算能力，給出更經濟、靈活、針對性強的服務方案，使生物制藥企業在產品研發時擁有體系龐大的數據支撐與模型支持。
當前研究人員普遍認為蛋白質設計的核心初衷是加速生物制藥的發展，以謀求用更顯的藥品來解決疑難雜癥。而對給定的預期功能，能否設計出滿足該功能需求的蛋白，是蛋白質設計研究的另一關注點，在新型生物藥開發的實際應用層面具有重要意義。北鯤云單節點206CPU核心，NvidaV100,A100等加速卡支持，多種交互方式，支持超過300種經過編譯優化的可以軟件，使生物信息研究、生命科學探索、生物制藥發展、蛋白設計等場景的云計算功能都能輕松達成，對推動行業發展具有重要意義。
展開 清華張瑩瑩團隊 AFM：基于絲膠蛋白-石墨烯的濕度響應“熱開關”及其在自適應織物中的應用
在絲膠蛋白方面，該團隊還曾報道了絲膠蛋白-碳納米管基電子墨水（Advanced Materials 2020, 32, 2000165.）、絲膠蛋白基多模式發光碳點（Small2021, 17, 2103623.）等成果。本工作在之前的基礎上，從一個新的角度展示了絲膠蛋白在智能穿戴領域的潛力。
原文鏈接：
http://doi.org/10.1002/adfm.202111121
絲膠蛋白-納米碳復合材料方面的工作：
https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/adma.202000165
工作介紹：
https://www.chem.tsinghua.edu.cn/info/1088/1905.htm
展開 東華大學張耀鵬教授團隊：低功耗、性能可調的絲素蛋白基生物憶阻器
圖1 采用蠶絲制備的仿生神經突觸示意圖
近日，東華大學纖維材料改性國家重點實驗室張耀鵬、范蘇娜團隊報道了一種基于絲素蛋白（SF）的低工作電流、低功耗生物阻器。通過摻雜銀離子及乙醇后處理，促進SF微晶的形成，誘導載流子沿相對固定的較短路徑進行傳輸，實現器件運行功耗、工作電流有效降低的同時，提高器件的憶阻穩定性。相關研究成果以題為"Low Power and Tunable Performance Bio-memristor Based on Silk Fibroin"發表于ACS Biomaterials Science& Engineering。論文第一作者為東華大學博士生
張藝
，共同通訊作者為東華大學
張耀鵬教授
和
范蘇娜博士
，韓芳教授為共同作者。
圖2 低功耗絲素蛋白憶阻器的工作示意圖
圖3 絲素蛋白基憶阻器的制備過程與分子結構
（a）SF基憶阻器的制造過程示意圖；(b) 器件照片；（c）乙醇處理前后SF/Ag復合膜的一維（1D）WAXD圖案和（d）結晶度統計。
研究者發現摻雜硝酸銀及乙醇后處理均會誘導SF由無規卷曲向β折疊結構轉變，形成微晶，獲得較高的結晶度。所得憶阻器件的穩定性顯著提升，啟動電壓明顯減小；且隨硝酸銀摻雜含量的增加，器件的穩定性與耐久性進一步增加，開關窗口逐漸減小。證實了憶阻器的穩定性和功耗與SF的凝聚態結構密切相關，且可通過后處理與摻雜金屬離子進行調控。
展開 《Science Adv.》可注射光敏水凝膠，金屬組裝遞送神經保護蛋白
先前，香港科技大學Bojing Jiang，Chao Yang和南方科技大學Xiaotian Liu等研究人員提出了一種簡單的方法，用于通過His6標簽蛋白的金屬定向組裝來創建可注射的光響應水凝膠。相關論文題為Injectable, photoresponsive hydrogels for delivering neuroprotective proteins enabled by metal-directed protein assembly發表在《Science Advances》上。B12依賴的感光蛋白CarHC可以通過氨基末端His6-tag與過渡金屬離子絡合，添加AdoB12后可以進一步經歷溶膠-凝膠轉變，從而形成具有明顯可注射性和光降解性的水凝膠。可誘導的相變進一步使得細胞和蛋白質的容易包封和釋放成為可能。將注射有白血病抑制因子修飾的Zn2+配位的凝膠注射到受傷的小鼠視神經中，導致延長的細胞信號傳導和增強的軸突再生。這項研究說明了設計可注射生物材料的有效策略。
【圖文解析】
1. 設計蛋白質構建體
為了檢查使用金屬離子將His6標記的重組蛋白組裝到水凝膠中同時保留其分子功能的可行性，作者選擇了His6標記的重組蛋白SpyTag-ELP-CarHC-ELP-SpyTag（ACA）作為模型系統（圖1），以前在大腸桿菌中表現出明顯的溶解性和表達產量。該構建體的主要結構域CarHC是B12依賴的感光體，它來自細菌轉錄調節劑，可控制類胡蘿卜素色素的生物合成。AdoB12中的C-Co鍵對綠光（522 nm）敏感。CarHC在黑暗中與輔因子AdoB12結合后會自組裝成四聚體，而在光照下會分解成單體，伴隨著AdoB12中不穩定的C-Co鍵的裂解，4'，5'-脫水腺苷的釋放和 His132與Co中心的協調（圖1）。
展開 
《Science Adv.》可注射光敏水凝膠，金屬組裝遞送神經保護蛋白
先前，香港科技大學Bojing Jiang，Chao Yang和南方科技大學Xiaotian Liu等研究人員提出了一種簡單的方法，用于通過His6標簽蛋白的金屬定向組裝來創建可注射的光響應水凝膠。相關論文題為Injectable, photoresponsive hydrogels for delivering neuroprotective proteins enabled by metal-directed protein assembly發表在《Science Advances》上。B12依賴的感光蛋白CarHC可以通過氨基末端His6-tag與過渡金屬離子絡合，添加AdoB12后可以進一步經歷溶膠-凝膠轉變，從而形成具有明顯可注射性和光降解性的水凝膠。可誘導的相變進一步使得細胞和蛋白質的容易包封和釋放成為可能。將注射有白血病抑制因子修飾的Zn2+配位的凝膠注射到受傷的小鼠視神經中，導致延長的細胞信號傳導和增強的軸突再生。這項研究說明了設計可注射生物材料的有效策略。
【圖文解析】
1. 設計蛋白質構建體
為了檢查使用金屬離子將His6標記的重組蛋白組裝到水凝膠中同時保留其分子功能的可行性，作者選擇了His6標記的重組蛋白SpyTag-ELP-CarHC-ELP-SpyTag（ACA）作為模型系統（圖1），以前在大腸桿菌中表現出明顯的溶解性和表達產量。該構建體的主要結構域CarHC是B12依賴的感光體，它來自細菌轉錄調節劑，可控制類胡蘿卜素色素的生物合成。AdoB12中的C-Co鍵對綠光（522 nm）敏感。CarHC在黑暗中與輔因子AdoB12結合后會自組裝成四聚體，而在光照下會分解成單體，伴隨著AdoB12中不穩定的C-Co鍵的裂解，4'，5'-脫水腺苷的釋放和 His132與Co中心的協調（圖1）。
展開 之江實驗室張磊教授/復旦大學魏大程教授《AFM》：面向塑料電子的高性能純絲素蛋白“紙”
絲素蛋白作為一種天然高分子材料，是替代塑料電子基底的理想材料。然而，大多數純絲素薄膜的本征脆性仍是影響其應用的關鍵因素。鑒于此，之江實驗室張磊教授團隊與復旦大學魏大程教授合作，利用微量離子介導的塑化作用，制備獲得了一種高性能絲素蛋白“紙”，為絲素薄膜的大規模制造和表皮電子技術領域提供新的思路。相關論文以“Shape-Engineerable Silk Fibroin Papers for Ideal Substrate Alternatives of Plastic Electronics”為題，發表于《Advanced Functional Materials》雜志上（DOI: 10.1002/adfm.202104088）。
天然高分子材料是未來“綠色”電子產品的潛在候選材料，相比于PI、PET、PEN、parylene等常用的柔性基底材料，天然高分子所包含的可酶促降解或可水解的化學鍵，常被用于制備生物可降解的電子材料。蠶絲源于自然界，資源豐富、易獲得，具有良好的生物相容性和可降解性，在塑料電子應用中有廣闊的前景。絲素材料中所包含的β-折疊可作為材料的增韌填料和物理交聯點，通過設計β折疊含量可有效控制絲素制品的可降解性。但是，受限于其高結晶度和無規卷曲的低塑性，傳統高結晶度的絲素薄膜常表現為脆性，難以有效應用于塑料電子器件中。與獲得廣泛研究的多相復合策略不同，本研究報道了一種微量離子介導的塑化策略，制備獲得了一種可進行形狀工程設計的純絲素蛋白“紙”，其可在干態情況下進行打印、激光蝕刻、機械雕刻以及揉搓而不發生斷裂（圖1），展現出優良的自支撐、透明、透氣、易加工與可打印特性。
展開 GROMACS計算蛋白-配體相互作用以及力場構建
然后通過手動或者對接的方式將蛋白和小分子組合。這樣就可以初步得到蛋白-配體復合物的構象。如下圖：
之前的模擬介紹過如何生成蛋白質的力場。如果此時使用gmx pdb2gmx -f AA.pdb -o AA.gro命令來建立力場時，會發現gromacs無法識別小分子并產生相關的力場。在此我們介紹一種生成力場的工具：CGenFF (https://cgenff.umaryland.edu/ )，我們可以通過該網站提供的工具產生mol2文件。其中要注意的是生成力場是一定要對配體把缺失的H原子補上，以生成準確的全原子力場。注意生成的mol2文件可能存在一些小錯誤需要手動修改。
在此我們還需要準備需要的力場文件，然后利用我們提供的腳本來進行力場的建立。大概命令為：python ff_charmm2gmx.py AA AA_fix.mol2 aa.str charmm36-mar2019.ff。力場生成后需要準確將力場文件以及對應的模擬參數文件逐個寫入top文件。如圖所示：
力場生成后我們可能還需要手動修改蛋白-配體結構文件。在此我們就可以通過使用對應命令來構建盒子并且添加溶劑。如圖所示
之后的模擬就可以按步驟利用對應的mdp文件生成tpr并且進行模擬。如：
gmx editconf -f complex.gro -o newbox.gro -bt cubic -d 1.0
gmx solvate -cp newbox.gro -cs spc216.gro -p topol.top -o solv.gro。
本文中，我們主要介紹了CGenFF 這一較為精確的力場產生工具。但是在使用該工具是仍會遇到各種問題，例如腳本內容的更換，原子的檢查以及成鍵信息或者位置限定的多種方式。
展開 基于Gromacs模擬軟件分析小分子配體與蛋白結合之后的穩定性
總結：通過上述對接，模擬，分析，我們可以了解蛋白與小分子結合的穩定性，來判斷結合的好壞。也可以利用模擬來提前預測小分子能否在實驗中得到好的驗證。
最后,如有MD相關需求,可以聯系我們.
微信公眾號:320科技工作室
VX: CAE320
